Formulation of Coniothyrium minitans for biocontrol of white mold caused by Sclerotinia sclerotiorum

O fungo Sclerotinia sclerotiorum, agente causal do mofo-branco, tem controle dificultado pela longevidade de seus escleródios no solo. Uma estratégia alternativa de controle é o uso do fungo antagonista Coniothyrium minitans, que parasita os escleródios de S. sclerotiorum e reduz a incidência da doença. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma formulação com C. minitans capaz de controlar o mofo-branco. Para tanto, picnídios deste fungo foram encapsulados com diferentes polímeros (alginato de sódio e pectina cítrica), caulim e substratos naturais (farinha de trigo e celulose). Das combinações obtidas, a formulação que continha 0,5% de alginato, 1,5% de celulose e 5% de caulim apresentou os melhores resultados quanto à viabilidade do fungo e controle da doença. Os grânulos da formulação armazenados a 4ºC apresentaram 100% de viabilidade do fungo. Nos grânulos armazenados a 28ºC, o fungo perdeu capacidade de crescer após os primeiros dois meses. O fungo formulado foi capaz de esporular sobre os grânulos incubados em meio de cultura BDA e no solo, como também foi capaz de reduzir a incidência da doença.Sclerotinia sclerotiorum, causal agent of white mold, maintains its resistant structures viable for many years in the soil, and its control is difficult. An alternative method for controlling it is the use of Coniothyrium minitans, an antagonistic fungus efficient in attacking the sclerotia. The objective of this work was to develop a method to encapsulate picnidia of C. minitans to control the white mold, using different polymers, such as alginate and pectin supplemented with wheat flour or cellulose and kaolin. Picnidia of C. minitans formulated in alginate 0.5%, cellulose 1.5%, and kaolin 5% survived better at 4 than at 28ºC when stored during two months. After this period, only the formulation stored at 4ºC maintained its viability. When the formulation was stored at 28ºC, the fungus lost its ability to grow after two months. The fungus formulated grew abundantly on the pellets when they were inoculated on PDA. They also reduced completely the disease incidence in infested soil

ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF CARBENDAZIM DEGRADING Trichoderma harzianum RIFAI MUTANTS

Mutants of Trichoderma harzianum Rifai, obtained after ultraviolet (UV) light exposure, showed high resistant to the fungicide benomyl. A mutant (2B6) was capable of degrading carbendazim, other fungicide of the benzimidazole fungicide. This mutant degraded 41.5% of the molecule within five days. This and others mutants (2B1 and 2B2) presented variation in size and frequency of uni-nucleated and/or bi-nucleated spores compared to the wild type. Four primers generated RAPDs patterns that allowed the mutant to be differentiated from the wild-type. It is concluded that using UV mutagenization, it is feasible to obtain strains of T. harzianum with improved pesticide degradation ability

Controle biológico da murcha de berinjela causada por Verticillium albo-atrum

The antagonistic activity of Trichoderma species against Verticillium wilt of eggplant was evaluated. The studies were undertaken in vitro and in vivo. A clearly defined zone, in which the growth of the pathogen was inhibited, was observed with some isolates of Trichoderma in vitro. The best results of the btocontrol under greenhouse conditions were obtained with Trichoderma hamatum and with the isolate T3 of Trichoderma sp. In a field experiment, T. lignorum and the isolate significantly reduced the disease. The mutants of Trichoderma, obtained by UV irradiation, were not efficient in controlling the disease.O controle biológico de Verticillium albo-atrum Reinke & Berth., agente causai da murcha de berinjela (Solanum melongena L.), foi feito em condições de laboratório e em condições de campo. Os melhores isolados de Trichoderma foram aqueles que apresentaram, em placas de Petri, uma zona de inibicão bem evidente. Trichoderma hamatum e o isolado T3 de Trichoderma reduziram sensivelmente a incidência da doença em condições de casa-de-vegetação. No campo, T. lignorum e o isolado T3 propiciaram os melhores resultados. Os mutantes de Trichoderma, obtidos por irradiação ultravioleta, não foram eficientes no biocontrole de Verticillium

FUNGICIDA METALAXIL NA MICROBIOTA E NA ATIVIDADE ENZIMÁTICA DO SOLO

Foram estudados os efeitos do metalaxil sobre a microbiota de solos coletados nos municípios paulistas de Aguai, Estiva Gerbi e Jaguariúna (Brasil), suplementados com doses de 3 e 30 µg i.a. g-1 de metalaxil pelo período de 32 dias. Populações de bactérias, actinomicetos e fungos foram monitoradas mediante contagem em placas com meios de cultura seletivos e pela atividade enzimática da fosfatase ácida (Pase) e desidrogenase (Dhase). A Pase foi avaliada pelo método da p-nitrofenilfosfatase e a Dhase pela quantificação do vermelho formazan produzido. Houve predominância de populações bacterianas em todos os solos, sendo os maiores valores de UFC g-1 observados nos solos suplementados com a dose de 30 µg i.a. g-1 de metalaxil. Populações de fungos apresentaram acentuado decréscimo após a incorporação do composto. A atividade Dhase foi inibida pela presença de metalaxil nos solos arenoso e controle. No solo argiloso houve acréscimo dessa atividade, mais significativo no período de 7 a 21 dias, nas duas doses de suplementação avaliadas. A atividade da Pase foi inibida em todos os três solos. METALAXIL ON SOIL MICROBIOT AND ENZYMATIC ACTIVITY Abstract The effects of Metalaxyl on soil microorganisms collected in Sao Paulo districts of Aguai, Estiva, Gerbi and Jaguariuna (Brazil), supplemented with doses of 3 and 30 µg a.i g-1 for the period of 32 days were studied. Bacterial, actinomycets and fungi were monitored by plate counting and by acid phosphatase (Pase) and dehydrogenase enzymatic activity (Dhase). The Pase was evaluated by the method of p-nitrophenilphosphatase and the Dhase by the quantification of the produced red formazan. Predominance of bacterial population was observed in all soils, being the higher values of CFU g-1 observed in soils supplemented with the dose of 30 µg a.i g-1 of Metalaxyl. Fungal population presented accentuated decrease after compost incorporation. Dhase activity was inhibited by the presence of Metalaxyl in sandy and control soils. In clay soils the activity was incremented, being more significant in the period of 7 to 21 days, in both supplementation doses. Pase activity was inhibited in all three soils

Nutritional requirements for the fungus Alternaria alternata

 Uma linhagem de Alternaria alternata (ALT A) foi cultivada em meio sintético com diferentes fontes de C, N e vitaminas. O crescimento micelial foi avaliado durante sete dias após a semeadura e a esporulação no décimo dia de incubação. O meio sintético básico suplementado com biotina, NH4Cl e os carboidratos maltose e glicose suportaram um bom crescimento micelial (em média 0,75 cm/dia). Galactose e arabinose induziram significativamente a produção de esporos (mL-1), da ordem de 5,0 x103 e 4,1 x 103, respectivamente. Nas diferentes fontes de vitamina e N não houve diferenças significativas quanto ao crescimento micelial e à esporulação.A strain of Alternaria alternata (ALT A) was tested using different sources of C, N and vitamins in order to find a medium for its growth and sporulation. The mycelial growth was evaluated for seven days after sowing and the sporulation on the tenth day of incubation. Among various C, N and vitamins compounds tested, highest mycelial growth was achieved with maltose and glucose (C), NH4Cl (N) and biotin, with an average ratio of 0.75 cm/day. Sporulation reached highest values with galactose and arabinose (5.0 x 103 and 4.1 x 103 conidia mL-1, respectively). Others vitamins and N compounds did not influence the growth and sporulation

INDUÇÃO DA ENZIMA PIROCATECASE POR Acinetobacter baumanii ENVOLVIDA NA BIODEGRADAÇÃO DO HERBICIDA DIURON

Uma linhagem de Acinetobacter baumanii, isolada da rizosfera de cana-de-açúcar, cultivada em solos tratados com Diuron foi incubadada em diferentes substratos para verificar a presença de catecol 1,2- dioxigenase (pirocatecase). Diferentes indutores foram adicionados ao meio de cultura (glicose, benzoato de sódio, Diuron, dicloroanilina, benzoato de sódio + glicose, benzoato de sódio + dicloroanilina, Diuron + glicose). As células bacterianas, obtidas pelo processo fermentativo, foram coletadas após centrifugação e rompidas por sonicação para extração da enzima intracelular. A linhagem apresentou alta atividade enzimática quando benzoato de sódio ou benzoato de sódio + glicose ou benzoato de sódio + dicloroanilina foram adicionados ao meio de cultura. A atividade enzimática acompanhou a produção de biomasa. No estudo da cinética de crescimento, usando Diuron como fonte de carbono e em três diferentes pH, essa linhagem apresentou melhor resultado quando cultivada em pH 6,8. Verificou-se pela avaliação da capacidade de A. baumanii transformar o Diuron, que o metabólito 3,4-dicloroanilina (3,4-DCA) não foi produzido. PYROCATECHASE INDUCED BY Acinetobacter baumanii INVOLVED IN THE BIODEGRADATION OF THE HERBICIDE DIURON Abstract An Acinetobacter baumanii strain, isolated from Diuron treated sugarcane rhizosphere, was grown in different substrates in order to determine the catechol 1,2-dioxygenase (pyrocatechase) presence. Different inducers were added to the culture media (glucose, sodium benzoate, Diuron, dichloroaniline, sodium benzoate plus glucose, sodium benzoate plus dichloroaniline, and Diuron plus glucose). The bacterial cells were harvested by centrifugation and disrupted by sonication for intracellular enzyme extraction. The strain showed high activity of pyrocatechase when sodium benzoate or sodium benzoate plus glucose or sodium benzoate plus dicloroaniline were added to the culture media. The enzymatic activity followed the biomass production. According to the growing kinetics study using Diuron as a carbon source, and with three different pH, this strain showed the best result when growed at pH 6.8. Estimating the A. baumanii capacity of transforming Diuron, it was observed that the 3,4-dichloroaniline (3,4-DCA) metabolite was not produced

Changes in hyphal morphology due to chitosan treatment in some fungal species

In this work, changes in the hyphal morphology due to chitosan treatment in some fungal species were studied. Scanning electron microscope (SEM) observations revealed that chitosans with molar fraction of acetyl groups (F A 0.16 and 0.18) and degree of polymerization (DP 1,089 and 1,242) had a direct effect on the morphology of the chitosan-treated fungi, reflecting its potential for causing a delay in the growth of Alternaria alternata (500 µg × mL-1), Botrytis cinerea (1,000 µg × mL-1), Penicillium expansum (1,000 µg × mL-1) and Rhizopus stolonifer (500 µg × mL-1). Mycelial aggregation and structural changes such as excessive branching, swelling of the cell wall and hyphae size reduction were observed in the micrographs.637646Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Bioprospecting endophytic bacteria for biological control of coffee leaf rust

Supressão de doenças de plantas por microrganismos endofíticos tem sido demonstrada em diversos patossistemas. Neste trabalho foram selecionados isolados de bactérias endofíticas de folhas e ramos de cafeeiro com potencial para o controle biológico da ferrugem do cafeeiro, pois é conhecido que esses microrganismos podem possuir essa característica. Bactérias endofíticas isoladas previamente de folhas e ramos de Coffea arabica L e Coffea robusta L foram avaliadas quanto ao seu potencial de biocontrole da ferrugem do café causada pelo fungo Hemileia vastatrix Berk. & Br., raça 2. As bactérias foram testadas para a inibição da germinação de urediniosporos do fungo e em bioensaios para o controle do desenvolvimento da ferrugem alaranjada do cafeeiro em discos de folhas, folhas destacadas e mudas da cv. Mundo Novo. Os isolados de bactérias endofíticas testados demonstraram eficácia na inibição da germinação de urediniosporos e/ou no desenvolvimento da ferrugem, com valores acima de 50%, embora os resultados obtidos nos testes de germinação de urediniosporos tenham sido inferiores ao tratamento com propiconazole (testemunha padrão). Nos testes em discos de folhas, folhas destacadas e em plantas de cafeeiro, os isolados endofíticos TG4-Ia, TF2-IIc, TF9-Ia, TG11-IIa e TF7-IIa demonstraram melhor controle da ferrugem do cafeeiro. Os isolados endofíticos TG4-Ia e TF9-Ia foram identificados como Bacillus lentimorbus Dutky e Bacillus cereus Frank. & Frank., respectivamente. De acordo com os resultados verifica-se que alguns isolados foram eficientes em controlar a ferrugem do cafeeiro, embora alguns tenham aumentado a severidade da doença. Apesar do número relativamente baixo de bactérias endofíticas testadas, resultados promissores foram obtidos em relação ao controle biológico da ferrugem, sendo que esses poderão no futuro apresentar uma alternativa aos fungicidas.Suppression of plant diseases due to the action of endophytic microorganisms has been demonstrated in several pathosystems. Experiments under controlled conditions involving endophytic bacteria isolated from leaves and branches of Coffea arabica L and Coffea robusta L were conducted with the objective of evaluating the inhibition of germination of Hemileia vastatrix Berk. & Br., race II, urediniospores and the control of coffee leaf rust development in tests with leaf discs, detached leaves, and on potted seedling of cv. Mundo Novo. The endophytic bacterial isolates tested proved to be effective in inhibiting urediniospore germination and/or rust development, with values above 50%, although the results obtained in urediniospore germination tests were inferior to the treatment with fungicide propiconazole. Endophytic isolates TG4-Ia, TF2-IIc, TF9-Ia, TG11-IIa, and TF7-IIa, demonstrated better coffee leaf rust control in leaf discs, detached leaves, and coffee plant tests. The endophytic isolates TG4-Ia and TF9-Ia were identified as Bacillus lentimorbus Dutky and Bacillus cereus Frank. & Frank., respectively. Some endophytic bacterial isolates were effective in controlling the coffee leaf rust, although some increased the severity of the disease. Even though a relatively small number of endophytic bacteria were tested, promising results were obtained regarding the efficiency of coffee leaf rust biocontrol. These selected agents appears to be an alternative for future replacement of chemical fungicide